Un enzim que catalitza una reacció que uneix dues molècules d'ADN mitjançant la formació d'un fosfo-diester bons entre el fosfat 3´ radicals hidroxil i 5´ de nucleòtids adjacents. Juga un paper important en la reparació de DNA i replicació. L'ADN ligasa és una de les eines essencials de tecnologia de ADN recombinant, permetent (entre altres coses) la incorporació de l'ADN aliè a vectors. L'enzim ligasa codificat pel Fag que T4 és comunament utilitzat en experiments de clonatge de gens. Es requereix ATP com a co-factor. T4 és utilitzat en vitro unir el vector i inserir DNAs.