Et enzym, der katalyserer en reaktion, der forbinder to DNA molekyler via dannelsen af en phospho-diester obligation mellem 3´ hydroxyl og 5´ phosphat af tilstødende nukleotider. Det spiller en vigtig rolle i DNA reparation og replikering. DNA ligase er en af de væsentlige værktøj af rekombinant DNA-teknologi, aktivering (blandt andet) inkorporering af fremmed DNA i vektorer. Ligase enzymet kodet af phage T4 er almindeligt anvendt i gen-kloning eksperimenter. Det kræver ATP som co-faktor. T4 er brugt in vitro- til at deltage i vektor og indsætte DNAs.