En metode til sekvensering længe (> 1 kb) klonede stykker af DNA. Oprindelige sekventering reaktion viser rækkefølgen af de første par hundrede nukleotider af klonede DNA. På grundlag af disse data, en primer indeholdende om 20 nukleotider og supplerer en sekvens nær slutningen af sekventeret DNA er syntetiseret, og derefter anvendes til sekvensering de næste par hundrede nukleotider af klonede DNA. Denne procedure gentages indtil den komplette nucleotidsekvensen af klonede DNA bestemmes.