Συνθήκες αντίδρασης που - ιδίως, θερμοκρασία, συγκέντρωση άλατος και pH - που υπαγορεύει η ανόπτηση της μονής-λανθάνον DNA/DNA, DNA/RNA και υβρίδια RNA/RNA. Σε υψηλό αυστηρότητας, duplexes σχηματίζονται μόνο μεταξύ των κλώνων με τέλεια συμπληρωματικότητα προς ένα, χαμηλότερη αυστηρότητας επιτρέπει ανόπτηση μεταξύ των κλώνων με κάποια ασυμφωνία μεταξύ των βάσεων.