Reaktio-olosuhteita - erityisesti lämpötila, suola pitoisuuteen ja pH -, jotka määräävät hehkutus ja yhden pulaan DNA/DNA, DNA/RNA ja RNA/RNA hybridit. Korkea tiukkuutta duplexes muodostaa vain välillä osa täydellinen one-to-one täydentävyys; pienempi tiukkuutta avulla hehkutus toimintalohkojen epäsuhta perustaa tietty kesken.