Une enzyme qui catalyse une réaction qui relie les deux molécules d'ADN via la formation d'une phospho-diester de liaison entre le phosphate hydroxyle et 5´ de 3´ de nucléotides adjacents. Il joue un rôle important dans la réplication et la réparation de l'ADN. DNA ligase est l'un des outils essentiels de la technologie de recombinaison de l'ADN, permettant (entre autres) l'incorporation d'ADN étranger dans les vecteurs. De l'enzyme de ligase codée par le phage que T4 est couramment utilisé dans les expériences de clonage de gènes. Requiere l'ATP comme un co-facteur. T4 est utilisé in vitro pour rejoindre le vecteur et insérer DNAs.