Une méthode de séquençage longtemps (> 1KO) cloné des morceaux d'ADN. La première réaction de séquençage révèle la séquence des premières quelques centaines nucléotides de l'ADN cloné. Sur la base de ces données, une amorce contenant de 20 nucléotides et complémentaire à une séquence vers la fin de la séquence ADN est synthétisée et est ensuite utilisée pour le séquençage des centaines nucléotides peu prochaines de l'ADN cloné. Cette procédure est répétée jusqu'à ce que la séquence nucléotidique complète de l'ADN cloné est déterminée.