Enzim yang catalyses a reaksi yang menghubungkan dua molekul DNA melalui pembentukan phospho-diester ikatan antara 3´ hidroksil dan 5´ fosfat berdekatan nukleotida. Memainkan peran penting dalam DNA perbaikan dan replikasi. DNA ligase adalah salah satu alat-alat penting teknologi DNA rekombinan, memungkinkan (antara lain) penggabungan DNA asing ke vektor. Enzim ligase dikodekan oleh FAG T4 umumnya digunakan dalam eksperimen kloning gen. Memerlukan ATP sebagai faktor Co. T4 adalah digunakan dalam vitro untuk bergabung dengan vektor dan masukkan DNAs.