Un enzima che catalizza una reazione che lega due molecole di DNA attraverso la formazione di un diestere fosfo-legame tra il fosfato di idrossile e 5´ 3´ di nucleotidi adiacenti. Svolge un ruolo importante nella riparazione del DNA e la replica. DNA ligasi sono uno degli strumenti essenziali della tecnologia del DNA ricombinante, consentendo (tra le altre cose) l'incorporazione di DNA estraneo in vettori. L'enzima ligasi codificata dal fago che T4 è comunemente usato negli esperimenti di clonaggio genico. Richiede ATP come co-fattore. T4 è usato in vitro per unire il vettore e inserire DNAs.