שיטת קביעת רצף זמן (> 1 kb) שיכפל חתיכות של DNA. הראשונית רצף התגובה חושף את רצף נוקלאוטידים מאה כמה הראשון של הדנ א המשוכפל. על בסיס נתונים אלה, פריימר המכילה על 20 נוקלאוטידים ומשלימים לרצף סמוך לסוף ברצף ה-DNA הוא מסונתז, ומשמש ואז רצף נוקלאוטידים מאה כמה הבא של הדנ א המשוכפל. הליך זה שוב ושוב עד נוקלאוטיד להשלים את רצף הדנ א המשוכפל.