Техника, по которому Вставка ДНК и векторных молекул перевариваются с двумя различными энзимами ограничения для создания не дополнительные липкие концы на любом конце каждого фрагмента ограничения, таким образом позволяя вставить, чтобы лигируют в вектор в конкретной ориентации и предотвращения повторного circularizing вектор.