ส่วนดีเอ็นเอที่สร้างขึ้น โดยย่อยอาหารด้วย endonuclease ข้อจำกัดเดียวจะมีส่วนขยายเพิ่มเติม 5´ และ 3´ ของ (เหนียวปลาย) ถ้าปลายเหล่านี้เป็น annealed และ ligated ส่วนดีเอ็นเอจะถูกแปลงเป็นรูปวงกลมปิด covalently หรือ circularized